Exemple de projet 2018-2019

Présentation très sommaire des grandes étapes d'un des projet de cette année

Questionnement : peut-on produire une bio-encre fluorescente à partir d'un micro-organisme

Recherches effectuées : bioluminescence, biofluorescence, micro-organismes fluiorescents, pigments fluorescents, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, pycyanine, pyoverdine, milieu de culture, technique de séparation, propriétés antibactériennes ...

Manipulations envisagées et réalisées :

Préparation d'un milieu de culture adapté à a production du pigment voulu (pyoverdine) par la bactérie retenue (P. fluorescens) : bouillon et gélose King

Vérification de la production de pigment sous UV à deux longueurs d'onde différentes

Screenshot 20190124 153952

Screenshot 20190124 154322

Remarque : cette observation renvoie à l'analyse spectrophotométrique du matériau des cuves disponibles dans notre laboratoire :

Propriétés de l'ADN

Spectres cuves comparaison

Récupération du pigment pyoverdine (pigment extracellulaire diffisuble)
- par centrifugation à partir d'un bouillon king B de 36 h inoculé par P. fluorescens et récupération du surnageant contenant la pyoverdine
- par récupération et broyage de la gélose sur laquelle des colonies de P. fluorescensse sont développées, puis centrifugation

Received 992708264186312

Dépôt sur papier et illumination sous UV à deux longueurs d'onde pour vérifier la présence du pigment

Received 841082216235738

Spectre d'absorption des surnageants entre 200 nm et 400 nm (dans l'UV) et recherche de pic(s) qui seraient spécifiques de la pyoverdine

Spectre absorption pyoverdine

Chromatographie sur couche mince des surnageants en présence d'un témoin fluorescent (fluorescéine)

Screenshot 20190118 140101

50445785 1306334019506857 41544754797740032 n

Antibiogramme en milieu gélosé pour vérifier si la pyoverdine a un effet antibactérien comme cela a été trouvé lors des recheches (agent sidérophore)

Screenshot 20190209 131838

- disque imprégné de pyoverdine en haut
- témoins positifs (disques commerciaux imprégnés d'antibiotiques (amoxicilline, céfotaxime) à droite et à gauche
- disque imprégné d'eau distillée, témoin négatif en bas