Exemple de projet 2018-2019

Présentation très sommaire des grandes étapes d'un des projet de cette année

Questionnement : peut-on produire une bio-encre fluorescente à partir d'un micro-organisme

Recherches effectuées : bioluminescence, biofluorescence, micro-organismes fluiorescents, pigments fluorescents, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, pycyanine, pyoverdine, milieu de culture, technique de séparation, propriétés antibactériennes ...

Manipulations envisagées et réalisées :

  • Préparation d'un milieu de culture adapté à a production du pigment voulu (pyoverdine) par la bactérie retenue (P. fluorescens) : bouillon et gélose King 

 

  • Vérification de la production de pigment sous UV à deux longueurs d'onde différentes

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Remarque : cette observation renvoie à l'analyse spectrophotométrique du matériau des cuves disponibles dans notre laboratoire :

Propriétés de l'ADN

Spectres cuves comparaison

 

  • Récupération du pigment pyoverdine (pigment extracellulaire diffisuble)
    • par centrifugation à partir d'un bouillon king B de 36 h inoculé par P. fluorescens et récupération du surnageant contenant la pyoverdine
    • par récupération et broyage de la gélose sur laquelle des colonies de P. fluorescensse sont développées, puis centrifugation

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  • Dépôt sur papier et illumination sous UV à deux longueurs d'onde pour vérifier la présence du pigment

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  • Spectre d'absorption des surnageants entre 200 nm et 400 nm (dans l'UV) et recherche de pic(s) qui seraient spécifiques de la pyoverdine

Spectre absorption pyoverdine

 

  • Chromatographie sur couche mince des surnageants en présence d'un témoin fluorescent (fluorescéine)

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  • Antibiogramme en milieu gélosé pour vérifier si la pyoverdine a un effet antibactérien comme cela a été trouvé lors des recheches (agent sidérophore)

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- disque imprégné de pyoverdine en haut
- témoins positifs (disques commerciaux imprégnés d'antibiotiques (amoxicilline, céfotaxime) à droite et à gauche
- disque imprégné d'eau distillée, témoin négatif en bas

 

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Date de dernière mise à jour : 11/02/2019