Objectif : déterminer l’origine (étiologie) d’une toxi-infection alimentaire collective (TIAC) par deux approches différentes :

• Une identification microbiologique du micro-organisme responsable, par des techniques de microbiologie conventionnelles 
• Une identification de la toxine par méthode immunologique

L'acronyme T.I.A.C. (Toxi-infections Alimentaires Collectives) recouvre différents mécanismes de pouvoir pathogène. On distingue ainsi :

• les intoxinations vraies (ou intoxications) où tous les troubles sont dus exclusivement à l'ingestion d'une toxine bactérienne préformée dans l'aliment (ex. bactéries Clostridium botulinium, Staphylococcus aureus entérotoxique)
• Les infections « d'origine alimentaire » = toxi-infections : il faut qu'il y ait ingestion d'aliment contenant des bactéries vivantes et qu'on les retrouve dans les muqueuses intestinales où elles se développent (bactéries entéro-invasives qui colonisent la muqueuse et peuvent envahir l'organisme = septicémie).

Certaines souches d’Escherichia coli sont productrices de shigatoxines responsables de colites hémorragiques. La transmission se fait via la consommation d'eau ou d'aliments contaminés par des matières fécales ou par contact de personne infectée à personne saine. Plusieurs souches et sérotypes plus ou moins virulents ont été isolés dans le monde. Le sérotype correspond à la classification des micro-organismes en fonction de la présence d’antigènes de surface.
E.coli O157:H7 est un sérotype d’E .coli potentiellement mortel, qui a pour principal habitat l'intérieur des intestins des bovins, a par exemple provoqué le décès de 35 personnes en Allemagne en 2011. La lettre « O » désigne un antigène de paroi et la lettre « H » désigne un antigène de flagelle.
Exemple 2024 : https://www.bfmtv.com/societe/une-fillette-de-7-ans-hospitalisee-depuis-decembre-apres-avoir-mange-du-fromage-contamine-par-e-coli_AV-202402090107.html

Staphylococcus aureus est le seul staphylocoque à produire éventuellement une entérotoxine (toxine protéique agissant au niveau intestinal) thermostable (résiste à 100 °C pendant une heure) et résistante aux sucs digestifs. Si cette toxine est produite dans l'aliment (la contamination se fait généralement en cuisine lors de la préparation), et même si celui-ci est chauffé, son ingestion provoquera, moins de 6 heures après son ingestion, des vomissements, nausées, douleurs abdominales qui disparaissent spontanément, généralement sans laisser de séquelles. Toutefois, chez de très rares individus, la toxine staphylococcique provoque la mort (sensibilités individuelles ou conditions physiologiques particulières).
30 à 60 % des souches de S. aureus produisent une entérotoxine pendant la phase exponentielle de croissance.
 

La souche à étudier provenant d'un malade, un micro-organisme de classe 2 (1), a été inoculée dans un bouillon cœur-cervelle et sur gélose nutritive ordinaire en tube, puis incubée 24 heures à 37 °C
(1) : agents biologiques pouvant provoquer une maladie chez l'homme ; leur propagation dans la collectivité est peu probable ; il existe généralement une prophylaxie ou un traitement efficaces 

Etude macrospique de l'isolement réalisée sur milieu BAIRD-PARKER

• Étude des milieux d'isolements Chapman et Baird-Parker : présenter, sous forme de tableau synthétique : observation, interprétation, conclusion.

• Indiquer la conclusion pouvant être apportée par la lecture de chaque milieu.

f) Identification de la souche par test d'agglutination sur lame (Pastorex Staph Plus)

• Interpréter et conclure

Comparaison de deux tests d'agglutination de fabricants différents

• Résumer tous les caractères morphologiques, culturaux et biochimiques de la souche étudiée et confirmer (ou infirmer) son appartenance à l'espèce aureus

g) Recherche de la thermonucléase pour détermination du caractère entérotoxique de la souche préalablement identifiée

• Indiquer quel est le lien entre entérotoxine staphylococcique et thermonucléase.

• Recherche de l'entérotoxine : schématiser, en utilisant les légendes proposées dans le document 1, l'assemblage moléculaire à la fin de la dernière étape de la recherche de l'entérotoxine par la technique immuno-enzymatique dans le cas d'un témoin positif

• Recherche de la thermonucléase
  -Schématiser l'aspect de chaque test effectué, interpréter et conclure.
  -Proposer la réalisation de témoins (positif et négatif) qui auraient dû être réalisés.

• Conclure sur le caractère entérotoxique de la souche testée.

Détermination du profil de sensibilité de la souche étudiée vis à vis de différents antibiotiques par la technique de l'antibiogramme standard

• Rédiger un schéma légendé de la gélose après l'incubation incluant : disque d'antibiotique, zone d'inhibition de culture, culture, zone correspondant à la concentration minimale inhibitrice.

• Reproduire et compléter le tableau suivant 

• Indiquer quel(s) antibiotique(s) choisir pour traiter le patient.

Détermination du la concentration minimale inhibitrice de la ceftriaxone sur S. aureus par dilution en milieu liquide

Préparation de l’inoculum bactérien  :
À partir d'une culture pure de 18 h (isolement sur GNO) :
-Préparer une suspension en eau physiologique équivalente à un étalon 0.5 Mc Farland
-Introduire 200 µL de cette suspension dans 25 mL de bouillon Mueller-Hinton
-Distribuer 1 mL dans 16 tubes à hémolyse è tubes notés INO.

Réalisation des dilutions en série de la solution d'antibiotique (1 plaque par binôme)
-Déposer 100 µL de milieu Mueller-Hinton  dans les puits 1 à 12.
-Déposer 100 µL d'antibiotique Ceftriaxone à 2,5  mg.mL^-1 dans le puits 1
-Après aspiration-refoulement, prélever 100 µL du puits 1 et les introduire dans le puits 2.
-Répé"ter l'opération jusqu'au puits 11.
-Prélevler 100 µL du puits 11, les jeter dans l'eau de Javel
-Déposer 100 µL d'inoculum bactérien dans les puits 1 à 12.
-Incubaer 18 h à 37 °C après avoir fermé hermétiquement les puits.

Vue d'ensemble :

Vue détaillée des puits 8 à 12 après 18 h d'incubation à 37 °C :

Détermination de la CMI en milieu liquide : pour l’antibiotique testé, résumer sous forme de tableau les informations suivantes :

- Les volumes de milieu Mueller-Hinton dans chaque cupule
- Le volume de solution d'antibiotique introduit dans la cupule 1.
- Le volume transféré entre chaque cupule
- La concentration intermédiaire en antibiotique exprimée en µg.mL^-1 dans chaque tube
- Le volume d'inoculum bactérien introduit dans chaque cupule
- La concentration finale en antibiotique exprimée en µg.mL^-1 dans chaque tube
- La présence (+) ou l’absence (-) de culture dans chaque cupule

• En déduire la CMI de la ceftriaxone sur la souche testée.

• Indiquer si la bactérie étudiée est sensible, intermédiaire ou résistante à cet antibiotique en utilisant les donnes fournies.

Présentation de l’antibiotique Ceftrixaone

La ceftriaxone est un antibiotique de la famille des bêtalactamines du groupe des céphalosporines de 3^ème génération : c’est une céphalosporine semi-synthétique à très large spectre d'action et résistante aux bêtalactamases.