Enzymologie - Dosage d'un substrat triglycérides en point final (M)
Objectif : effectuer le dosage d’un molécule substrat par une méthode enzymatique, très spécifique, dite en point final.
Le bilan lipidique permet de mesurer les différents composants lipidiques présents dans le sang afin d'évaluer les risques athérogènes d'un patient pour prendre des mesures préventives (habitudes alimentaires, hygiène de vie) ou thérapeutiques adaptées. Ce bilan s’analyse sur une longue période à travers plusieurs mesures pour évaluer le risque cardiovasculaire.
Le bilan lipidique comprend ainsi les dosages :
du cholestérol total : un corps gras qui entre notamment dans la composition des membranes cellulaires et qui sert à la synthèse d’hormones stéroïdes ;
du cholestérol-LDL, que l’on considère comme le
« mauvais » cholestérol : le cholestérol est lié à des transporteurs, les LDL (Low-Density Lipoproteins) qui naviguent du foie vers le reste de l’organisme où il est distribué ;
du cholestérol-HDL, désigné comme le « bon » cholestérol : le cholestérol est lié à des transporteurs, les HDL (High-Density Lipoproteins) qui circulent vers le foie, là où le cholestérol est stocké ;
des triglycérides : un type de graisse qui constitue une importante réserve d’énergie et qui provient essentiellement des sucres et de l’alcool ingérés en grande quantité.
Les triglycérides proviennent de l’alimentation et sont aussi synthétisées par le foie. Ils sont constitués par l’association d’une molécule de glycérol et de trois molécules d’acides gras (figure 1 et 2).
Lorsqu’ils sont trop nombreux dans le sang, ils constituent un facteur de risque cardiovasculaire car ils contribuent à « boucher » les artères (figure 3).
Si la triglycéridémie est supérieure à 4.00 g·L-1 (soit 4,55 mmol·L-1), quel que soit le niveau de cholestérol total, il s’agit d’une hypertriglycéridémie.
Dosage des triglycérides sériques dans le plasma d’un patient
Le document 1 présente un extrait de la notice du dosage enzymatique des triglycérides.
Indiquer à quelle(s) réaction(s correspond(ent) :
- la réaction principale (réaction qui fait intervenir la molécule à doser). Justifier.
- la réaction indicatrice (réaction qui fait apparaitre ou disparaître le chromophore). Justifier.
- la·les réaction·s intermédiaire·s. Justifier.
En se basant sur la procédure opératoire décrite dans le document 1, réaliser un tableau de manipulation comprenant les volumes ainsi que les absorbances à mesurer pour la réalisation :
- d’une cuve "blanc réactif" notée B
- d’une cuve "étalon" notée E
- d’une cuve "contrôle" notée C avec la solution étalon de contrôle interne
- d’une cuve "essai" noté S contenant le sérum à analyser.
Indiquer les conditions d’incubation et les justifier.
Argumenter sur le fait que la méthode soit dite en point final.
En déduire si le substrat à doser doit être en concentration limitante ou au contraire en excès
Démontrer comment a été établie l’équation aux grandeurs dans le paragraphe CALCUL
Réalisation pratique
Réaliser le dosage des triglycérides sériques de l’échantillon de plasma fourni selon les consignes données en réponse à la question Q2.
Réactifs
Sérum à analyser, noté S
Solution étalon E de triglycérides : c(triglycérides ; sol. étalon E) = 2,28·10-3 mol·L-1
Solution contrôle C de triglycérides : c(triglycérides ; sol. contrôle C) = 1,14·10-3 mol·L-1
Présentation et exploitation des résultats
Présenter les indications de mesure sous une forme appropriée.
Calculer pour la solution contrôle, la concentration en quantité de matière de triglycérides exprimée en mol·L-1 puis la concentration en masse de triglycérides exprimée en g·L-1. Donnée : Mtriglycérides = 879 g·mol-1
Vérifier l’exactitude de mesure de la concentration en quantité de matière de triglycérides dans la solution contrôle C en utilisant l'aide-mémoire de métrologie. Donnée : limites d’acceptabilité pour la solution contrôle : [0.92 g·L-1 ; 1,08 g·L-1]
Calculer pour le sérum testé, la concentration en quantité de matières de triglycérides exprimée en mmol.L-1 puis la concentration en masse de triglycérides exprimée en g·L-1.
Exprimer le résultat de mesure de la concentration en masse de triglycérides (Incertitude-type composée : uc = 0,09 g·L-1) et conclure sur la triglycéridémie du patient.
Exemple de valeurs mesurées et de calculs efffectués
