Objectif : mettre en évidence les antigènes de surface des hématies et les anticorps plasmatiques dans la détermination du système ABO, par réaction d'agglutination chimique simulant une agglutination (l'emploi de sang humaine n'étant plus autorisé)

Le sang est un tissu liquide que l’on peut facilement prélever sur un individu sain pour le transfuser à un individu malade.

Or, malgré une composition cellulaire identique de ce tissu, il existe une variabilité, ou polymorphisme, des divers éléments du sang entre les individus, ce qui rend impossible la transfusion entre certains groupes de personnes. On dit des personnes qui présentent une même caractéristique qu’elles appartiennent au même groupe sanguin.

La découverte du système ABO en 1900 par Karl Landsteiner a permis de comprendre pourquoi certaines transfusions sanguines étaient couronnées de succès, alors que d'autres se terminaient tragiquement : l'injection de sang d'un donneur non compatible avec le receveur peut entraîner des accidents transfusionnels mortels. C’est pourquoi la détermination des groupes sanguins (essentiellement ABO et Rhésus) est si importante.

Principe de la détermination du groupe sanguin au laboratoire

On fait une double mise en évidence :

• Épreuve globulaire de Beth-Vincent : recherche des antigènes sur les hématiesà tester avec des Ac spécifiques des Ag A et Ag B (sérums test anti-A, anti-B et anti-A + anti-B).
• Épreuve sérique de Simonin : recherche des anticorps dans le plasma à tester en utilisant des Ag spécifiques (hématies test A, B ou O).

Pour cela on centrifuge le sang à étudier, préalablement prélevé sur anticoagulant,  afin de séparer les hématies du plasma.

Remarque : le groupage sanguin est ici simulé avec du sang artificiel pour cause d'interdiction d'utilisation de sang humain issu des CTS (Centres de Transfusion Sanguine).

Procédure opératoire (un binôme teste un des quatre sang proposé)

SANS LES GANTS À USAGE UNIQUE

Identification des témoins et des tests
-Sur chaque plaque de porcelaine à concavité, noter la référence du sang testé
-Identifier clairement chaque concavité pour la faire correspondre à chaque : témoins, épreuve globulaire de Beth-Vincent, épreuve sérique de Simonin, recherche de l’Ag D.

AVEC LES GANTS À USAGE UNIQUE

Séparer le plasma des hématies à tester (après centrifugation du sang 5 min à 1000 tpm)
-Avec une pipette à usage unique, transférer délicatement le plasma dans un tube à hémolyse marqué Plasma à tester.
-Annoter le tube contenant le culot d’hématie Hématies à tester.

• Les témoins obligatoires (une concavité par témoin)
  • Témoin auto : 1 goutte de plasma à tester + 1 goutte d’hématies à tester
  • Témoin AB : 1 goutte de plasma de sujet AB + 1 goutte d’hématies à tester
  • Témoin allo : 1 goutte de plasma à tester + 1 goutte d’hématies tests O

Épreuve plasmatique de Simonin (une concavité par test)
-1 goutte de suspension d’hématies-tests A + une goutte de plasma à tester
-1 goutte de suspension d’hématies-tests B + une goutte de plasma à tester

Épreuve globulaire de Beth-Vincent (une concavité par test)
-1 goutte de sérum test anti-A + une goutte d’hématies à tester
-1 goutte de sérum test anti-B + une goutte d’hématies à tester
-1 goutte de sérum test anti-A et anti-B + une goutte d’hématies à tester

Recherche de l’antigène D (facteur Rhésus)
-1 goutte de sérum anti-D + 1 goutte d’hématies à teste

Les réactions 
-Dans chaque concavité, mélanger délicatement et soigneusement les deux gouttes avec un agitateur jetable en plastique. Changer d'agitateur entre chaque concavité.
-Imprimer à la plaque un mouvement lent de roulis pendant au moins 60 secondes en prenant garde de ne pas mélanger les étalements entre eux.
-Observer et rechercher une éventuelle agglutination après une à trois minutes

ENLEVER LES GANTS À USAGE UNIQUE

Exemples de résultats obtenus avec des kits de simulation de groupage sanguin (Jeulin, Sordalab)

Témoins