La famille des Streptococcaceae comprend les genres Streptococcus et Enterococcus.
Leurs caractères communs sont :
- cocci en chaînettes ou diplocoques 
- immobiles
- à Gram (+),
- présence parfois d'une capsule,
- asporulés,
- catalase (-),
- anaérobies aérotolérants,
- fermentatifs du glucose,
- petites colonies transparentes ou muqueuses (capsule)

Leur classification se fonde sur plusieurs critères :

• classification d'après leur pouvoir hémolytique :
  

• classification d'après leur équipement antigénique (classification de Lancefield) :
  Un antigène de la paroi, le polyoside C permet de définir plusieurs groupes : A.B.C.D.E.F.G.H.K.L.M.N.O.P.R.S.T.U.V.

Certains streptocoques, dépourvus de polyoside C, sont dits "non groupables". 

On peut mettre en évidence le polyoside C :

• par la technique de Lancefield qui comprend une extraction du polyoside C à partir d'une suspension de la souche par l'acide chlorhydrique à chaud  par exemple, suivie d'une réaction de précipitation en tube en présence des antisérums spécifiques.
• par précipitation en milieu gélosé par contre-immunoélectrophorèse.
• par immunofluorescence directe (pour les streptocoques du groupe A)
• par coagglutination de staphylocoques ou de particules de latex sensibilisés par des anticorps spécifiques (cette dernière technique est actuellement la plus utilisée)

• classification d'après leurs caractères biochimiques :

Ils permettent d'individualiser des espèces dans le genre : Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus bovis etc...

Attention : ces classifications ne sont pas superposables !!

 

1^ère partie : identification d'un streptocoque

Classer les structures externes des streptocoques, de l’extérieur vers l’intérieur

Compléter le tableau indiquant les différents types d'éhmolyse sur gélose au sang :

Effectuer une recherche sur BAOBAB  (BAse d'OBservation des Agents Biologiques) avec "Streptococcus" comme entrée

Résultat de la recherche :

En déduire les mesures de prévention collectives et individuelles à mettre en oeuvre.

 

Lecture de l'isolement réalisé sur gélose au sang :

Recherche d'une capsule par la coloration à l'encre de Chine (état frais, grossissement total x 400) :

Orienter l'identification de la souche testées à l'aide des documents suivants :

 

Critères d'orientation des bactéries vers les principaux genres :

Critères d'identification des streptocoques :

 

Effectuer l'identification de la souche testée à l'aide du résultat obtenu et du principe du test Slidex pneumo-kit à l'aide de la notice donnée ci-après

Résultat obtenu :

Notice du kit Slidex Pneumo Kit (Biomérieux) :

Schématiser au niveau moléculaire les résultats obtenus pour chaque test réalisé avec le kit d’agglutination fourni :
- représenter les particules sensibiliésµ
- représenter les bactéries et les antigènes impliqués.
- indiquer si il s'agit d'une aggliutination active ou passive, directe ou indirecte
- Interpréter les résultats présentés et conclure sur l'identité de la souche étudiée.

 

2^ème partie : diagnostic d'une infection à streptocoque par réaction de neutralisation de l'activité enzymatique d'une toxine bactérienne  : recherche et titration des ASLO dans le sérum

Les streptocoques du groupe A (Streptococcus pyogenes è bactérie responsable d’un grand nombre d’infections : angine streptococcique, scarlatine - Impétigo – érysipèle….) et quelques souches des groupes C et G, ainsi que les pneumocoques produisent une exotoxine : la Streptolysine O (SLO), qui est une enzyme possédant :

• Une activité hémolytique : elle provoque l’hémolyse des hématies après incubation à 37 °C ;
• Une activité lytique sur certaines cellules eucaryotes (granulocytes, plaquettes) ;
• Une activité immunogène : sa libération dans l’organisme entraîne la production d’Ac spécifiques : les Ac anti-streptolysine O (ASLO).

Le sérodiagnostic aux ASLO (ou aux ASDB) est utilisé pour diagnostiquer les Streptococcies.

L’objectif est de déterminer si un patient est atteint d’une infection à streptocoques ; une recherche qualitative est menée dans un premier temps, suivie d’une recherche quantitative si le premier test s’avère positif.

Principe du kit ASLO Latex :

Donner le principe du test de détection des ASLO.
Indiquer s'il s'agit d'une réaction active/passive et directe/indirecte. Justifier.

Faire un schéma légendé montrant, au niveau moléculaire :
- une réaction positive
- une réaction négative

Indiquer ce que traduit une agglutination pour le sérum testé.

 

Principe du test ASL-kit

Faire un schéma pour montrer les réactions mises en jeu en utilisant les légendes suivantes :

- lorsqu’il y a absence d'hémolyse (donc en …..…………….…. d’ASLO) :

- lorsqu’il y a hémolyse (donc en …………..………. d’ASLO) :

 

Trois cas de figure peuvent être observés :
- une absence d’hémolyse (notée AH)
- une hémolyse partielle (notée HP)
- une hémolyse totale (notée HT)

En se basant sur les connaissances acquises (cellules en suspension, activité enzymatique neutralisée ou non), schématiser le contenu d’un microtube dans lequel on observerait chacun de ces résultats.

Donner le rôle de la cupule 8 et la lecture attendue.

Observer les résultats des cupules et les décrire sous forme d’un tableau indiquant :
- numéro de cupule à partir du repère
- titre en U ASLO. mL^-1
- observation (schéma légendé)
- interprétation pour chaque cupule (AH, HP, HT)

Définir la notion de "titre" du sérum
Déduire des résultats le titre du sérum testé en U ASLO. mL^-1. Justifier la réponse.
Interpréter ce résultat en utilisant les données fournies dans la notice.

Variante de cette manipulation : 
- Le sérum est dilué selon une progression connue.
- La streptolysine O est ajoutée en concentration constante
-L’excès de streptolysine O non neutralisée est révélé par l’addition d'un système révélateur : globules rouges de lapin ou de mouton :

La procédure opératoire est la suivante :

Le résultat obtenu après 1 heure de sédimentation :

Puits n°9 : Indiquer le résultat attendu. Justifier. Indiquer ce que cela permet de vérifier.

Puits n°10 : Indiquer le résultat attendu. Justifier. Indiquer ce que cela permet de vérifier.

Rédiger un tableau indiquant :
- le numéro de puits
- la dilution du sérum dans chaque puits (NB : ne pas tenir compte pour ce calcul de l'ajout de la SLO et du système révélateur)
- l'observation des résultats dans chaque puits sous forme de schéma légendé
- l'interprétation pour chaque cupule : AH, HP, HT.

Valider les témoins (Puits 9 et 10)

Définir la notion de "titre" du sérum.

Déduire des résultats le titre du sérum testé en U ASLO. mL^-1.

Interpréter ce résultat en utilisant les données fournies dans le document 2. 

Vérification du système révélateur : Rabbit red cells
à gauche, flacon de l'an dernier : le shématies ont été totalement lysées, système révélateur à jeter
a droite, flacon reçu deux jours avant la manipulation

Test de 4 sérums différents, chacun étant predilué au 1/40. Dilution en série de raison 1/2 ( puits 1 à 8).
Puits 9 : témoin hémolyse 0 %
Puits 10 : témoin hémolyse 100 %

Traitement d'un échantillon de sang à tester pour le titrage des ASLO en conditions de fidélité intermédiaire :
- même matériau (ici le sérum)
- même méthode
- mêmes moyens
- même milieu
- dans un court intervalle de temps
- mais avec différents manipulateurs

Ici :
- 8 manipulateurs lisent le titre en ASLO dans le puits 4
- 4 manipulateurs lisent le titre en ASLO dans le puits 5
- 1 manipulateur lit le titre en ASLO dans le puits 3
- 1 manipulateur lit le titre en ASLO dans le puits 2.
- 1 manipulateur invalide son test (témoin hémolyse 100% non réalisé)