Préparation et propriétés de milieux de culture (M)
Objectifs :
- préparer de façon autonome un milieu de culture, depuis la pesée jusqu'au coulage dans les boites de Pétri
- ensemencer chaque milieu de culture avec 8 souches bactériennes différentes (Gram + ou -) pour vérifier si la croissance est possible et l'aspect obtenu après culture.
- comprendre pourquoi une bactérie cultive ou non sur un milieu et à quoi est du l'aspect qu'elle présente sur chacun des milieux testé
- préparer une démonstration de "Microbial art" pour la journée portes ouvertes.
Un milieu de culture est une préparation, contenant des substances (biologiques ou chimiques) qui reproduit un environnement (nutriments, pH, pression osmotique) permettant à certains types de micro-organismes de se multiplier.
Il existe une grande variété de milieux de culture qui sont utilisés pour produire, conserver, isoler ou identifier certains micro-organismes.
Voici quelques sources utiles pour compléter le propos :
- Milieux de culture (source : Wikipedia)
- Liste de milieux de culture (source : Wikipedia) (remarque : liste non exhaustive !)
- Les milieux de culture selon leurs usages (source : site internet du Lycée de la Vallée de Chevreuse
8 milieux de culture sont à préparer par groupes de 3 élèves (1 groupe è 1 milieu), leur compostions et mode de préparations sont présentés dans les documents 1 à
Exlpiquer pourquoi les milieux de culture sont stockés sous forme déshydratés.
Calculer, en mm3, le volume de milieu coulé dans une petite boîte de Pétri de diamètre 50 mm, sur 3 mm de hauteur. Arrondir la valeur sans virgule. Calculer le volume pour 6 boites.
Convertir le volume précédent en mL (arrondir sans virgule).
Calculer le volume de milieu nécessaire pour préparer 4 grandes boites de pétri (90 mm de diamètre) sachant que la boite doit contenir une hauteur de 3 mm de milie
Matériel biologique : souches bactériennes de classe 1 (bouillons nutritifs ordinaires ensemencés la veille et incubés 24 h à 37 °C)
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Escherichia coli (Gram -) |
Pseudomonas fluorescens (Gram -) |
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Serratia marcescens (Gram -) |
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Bacillus cereus (Gram +) |
Micrococcus luteus (Gram +) |
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Staphylococcus xylosus (Gram +) |
Staphylococcus epidermidis (Gram +) |
Préparation du milieu de culture : choisir un milieu de culture par trinôme
- Étiqueter 8 petites boites de Pétri du nom du milieu à préparer.
- Peser la masse nécessaire pour préparer 50 mL de milieu de culture en suivant les consignes des documents 1 à 8 (Attention : masses différentes pur chaque milieu)
- Peser directement dans un bécher la masse voulue.
- Prélever 50 mL d'eau préalablement portée à ébullition avec l'éprouvette graduée.
- Rajouter progressivement les 50 mL d’eau distillée préalablement portée à ébullition tout en agitant jusqu’à dissolution complète.
- Répartir le contenu dans 8 petites boites de Pétri en condition aseptique.
- Une fois solidifiée, distribuer une gélose à chaque autre binôme.
Ensemencement des milieux : 4 milieux par trinôme + 1 micro-organisme
Chaque binôme ensemence un micro-organisme parmi les 8 proposés.
Réaliser un isolement de la souche choisie sur chacun des 4 milieux.
Attention : une bonne organisation est indispensable (étiquetage des boites : nom binôme, nom milieu, nom micro-organisme ensemencé).
Milieux préparés (jour 1) :
Observation des milieux après 24 h de culture (jour 2) :
Milieu DRIGALSKI :
- à droite, une souche lactose (-) qui présente la particularité de produire un pigment rouge (bactérie : Serratia marcescens), et qui est le plus souvent lactose (+) !
- à gauche, une souche lactose (+) (bactérie : Escherichia coli), avec une zone redevenue verte, probablement par réalcalinisation du milieu suite à l'épuisement du lactose à cet endroit (utilisation de peptones)
Conclusion : se méfier des clichés "la microbiologie, c'est plus facile que la biochimie". N'oublions pas que nous travaillons avec des organismes vivants, pas avec des solutions.
Milieu HEKTOEN
Milieu CHAPMAN
- à droite, une souche mannitol (-) qui cultive mais n'acidifie pas le milieu (bactérie : Staphylococcus epidermidis)
- au centre, une souche mannitol (+) qui cultive ET acidifie le milieu (bactérie : Staphylococcus xylosus)
- à gauche , une souche mannitol (-) (bactérie : Pseudomonas fluorescens) ; notons que la couleur du milieu est nettement plus vive que celle du milieu de droite
Milieu EMB
Bactérie Escherichia coli avec son aspect caractéristique sur ce milie (aspect en "dos de scarabée")
Milieu Baird-Parker
Bactérie Staphylococcus xylosus présentant :
- des colonies noires, due à la réduction du tellurite (présent dans le milieu) en tellure ;
- un halo clair autour de la colonie du à l'hydrolyse (protéolyse) des protéines du jaune d'œuf présent dans le milieu ;
- un liseré blanc opaque du à l'hydrolyse, par une lécithinase, des lécithines du jaune d'œuf qui se traduit par (précipité blanc des acides gras).
Exemples de fiche milieu de culture réalisée par un groupe de 3 élèves au cours de cette activité :
Date de dernière mise à jour : 17/02/2024
Commentaires
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bonjour
je cherche un schéma expliquant comment homogénéiser l'inoculum au milieu de culture ds une boite de pétri en faisant des 8
auriez vous ce type de schéma svp merci
un schéma pour expliquer comment faire tourner les boites en faisant un 8 ??? -
Bonjour,
Actuellement étudiante à l'université de La Rochelle, je souhaiterais savoir si il serait possible d'utiliser vos images dans le cadre d'une présentation de microbiologie qui sera présentée en classe ?
Vos images nous permettront d'enrichir notre projet en plus de nos photos.
Cordialement, Dorine Reinhard.
Bonjour Mes images sont libres de droit (peut-être pas pertinent mais vraiment autre chose à faire que de m'occuper de ça). Donc oui pas de problèmes pour les utiliser, pour peu que la source soit mentionnée une fois. -
Bonjour,
Je suis actuellement enseignant en lycée professionnel en Biotechnologie Santé Environnement. Je souhaite préparer les CAPET BGB l'an prochain.
Je suis impressionné par l'originalité de vos séances de travaux pratiques. Quel travail ! Le rendu est très intéressant.
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