Présentation de la cellule (ou hématimètre) de Malassez

Utilisé pour le comptage de  cellules (animales, végétales, fungiques) en suspension dans un liquide (à l’origine, pour le comptage des cellules sanguines, d’où son nom), l'hématimètre de Malassez est une épaisse lame de verre creusée de rigoles qui délimitent des plates-formes :

• 2 plates-formes latérales surélevées qui supportent une lamelle en verre, épaisse et plane : la lamelle hématimétrique ;
• 1 plate-forme centrale légèrement abaissée sur laquelle est gravé un quadrillage.

• Entre la lamelle et la plate-forme centrale est créée une cavité qui recevra la suspension.
• La distance (lamelle/plate-forme) définit la profondeur (P) connue de l’hématimètre
• Le quadrillage de la plate-forme centrale a une surface précise et connue (S)
• Le volume (V) de suspension dans lequel les cellules sont comptées est donc : V  = p  x  S

Exemple de remplissage d'un cellule de Malassez à 2 chambres de comptage :

Ne pas oublier que l'exposition à la source de lumière du microscope provoque un échauffement et donc une évaporation du liquide contenu dans la chambre hématimétrique.
Le volume de celle-ci étant très faible, le comptage doit être rapide, sans quoi la diminution du volume va entrainer une erreur importante du comptage.

Démonstration en vidéo 

Dénombrement des levures vivantes par cytométrie directe

Pour vérifier la viabilité des levures de la préculture, procéder ainsi :

• Homogénéiser soigneusement la préculture.
• Dans un tube Eppendorf, introduire à la pipette à piston 100 µL de préculture et 100 µL de bleu de méthylène de Funk
• Homogénéiser doucement et soigneusement.

Donnée : Le bleu de méthylène de Funk est une solution colorante vitale. Les cellules vivantes rejettent ce colorant, les cellules mortes le gardent.

• Remplir la cellule de Malassez avec la suspension réalisée 
• Placer la cellule de Malassez sur la platine du microscope et laisser sédimenter 5 minutes.
• Vérifier l’homogénéité de la répartition à l’objectif x 10 
• Effectuer la numération (compter au moins 200 cellules) en comptant d’une part  les cellules vivantes et d’autre part les cellules mortes, en dénombrant sur des rectangles situés aux quatre coins opposés du quadrillage, puis éventuellement sur d’autres rectangles éloignés des précédents.

Déterminer le facteur de dilution Fd de la préculture en présence du bleu de Funk.

Présenter les valeurs mesurées du comptage dans un tableau indiquant :
- pour chaque unité de comptage, le nombre de levures vivantes et le nombre de levures mortes
-  le nombre total de levure vivantes et mortes.

Calculer le pourcentage de levures vivantes.

Déterminer C_{N (levures vivantes ; préculture)} : la concentration en nombre de levures vivantes par mL^-1 de préculture  en tenant compte du facteur de dilution.
( établir l’équation aux grandeurs, aux unités, et aux valeurs numériques).

Conclure sur l’utilisation ou non de cette préculture pour mener à bien la fermentation.
(rechercher l’information nécessaire dans le contexte)

Exemple de valeurs calculées