Détermination de l'activité enzymatique de l'ALAT (M)
Objectif : effectuer le dosage de l’activité de l'enzyme plasmatique Alanine Amino Transférase (ALAT aussi nommée GPT) pour établir un diagnostic chez un patient.
Contexte
La réalisation de tests enzymatiques est une procédure de routine dans les laboratoires d’analyse médicale (LAM) dans le cadre de la recherche de pathologies. Ces tests peuvent être réalisées sur du plasma (ou sérum), du liquide céphalorachidien, de l’urine…
On peut alors doser soit un substrat, soit une activité enzymatique : en effet, lors d’une souffrance cellulaire, des enzymes habituellement intracellulaires peuvent se retrouver dans le plasma à de fortes concentrations. L’aide au diagnostic est facilitée par la connaissance de la provenance de l’enzyme retrouvée en quantité anormale :
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Enzyme |
Source |
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Alanine aminotransférase (ALAT) |
Foie |
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Aspartate aminotransférase (ASAT) |
Cœur, muscle squelettique |
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Créatine kinase (CK) |
Muscle, cœur, cerveau |
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Phosphatase acide (PAC) |
Prostate |
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Phosphatase alcaline (PAL) |
Muqueuse intestinale, rein, os |
Tableau 1 : provenance de quelques enzymes utiles au diagnostic médical
[D’après l’ouvrage : Enzymologie et applications de Jean-Pierre SINE (édition ellipses 2010)]
Dans le cadre du suivi médical de Mr Cubi, consommateur régulier de boissons alcoolisées, son médecin traitant demande à un laboratoire d’analyse de biologie médicale (LAM) le dosage de l’ALAT afin de poser un diagnostic médical.
Sécurité
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Réactifs |
Pictogrammes |
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Plasma à tester |
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Le document 1 présente un extrait de la notice du dosage de l’activité enzymatique de l’alanine-aminotransférase ALAT (aussi appelée glutamate pyruvate transaminase GPT) dans le plasma.
- Indiquer :
- La nature du constituant dosé (substrat ou activité d’une enzyme)
- La méthode mise en oeuvre
- La composition qualitative et quantitative du blanc réactif - À l'aide de la fiche protocole et du document ci-contre, expliquer comment va évoluer l'absorbance au cours de ce dosage.
- Proposer une justification pour les temps d’attente de 10 minutes (étape b) et de 1 minute (étape f).
- Rechercher un danger éventuel, sa nature, la ou les voies d’exposition/transmission à ce danger.
Proposer la (les)mesure(s) de prévention adaptée(s), collectives et/ou individuelle.
Réalisation pratique
T1. Réaliser le dosage de l’activité l’ALAT dans le plasma de la patiente selon les consignes données dans le document 1.
Cinétique en temps réel de l’activité l’ALAT telle que vue sur l'écran du Pc pilotant le spetrophotomètre
Cinétique tracée sur le tableur à partir de valeurs d'absorbances relevées toutes les 30 secondes directement sur le spetrophotomètre
Présentation et exploitation des résultats
- Présenter les valeurs mesurées dans le tableur-grapheur.
- Tracer le nuage de points : Aà 340 nm contre blanc réactif = f(temps en secondes).
Titrer et légender le graphe.
Afficher l’équation de la droite et le coefficient de détermination R². - Etablir l’équation aux valeurs numériques de la vitesse initiale de transformation de l'alanine, ξi en mol.s-1. Calculer la valeur de cette grandeur.
- Etablir l’équation aux valeurs numériques de la concentration d’activité catalytique b en nkat·L-1 et en U·L-1.
- Calculer la valeur de cette grandeur et l’exprimer correctement.
Date de dernière mise à jour : 06/03/2024
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