Préparation et propriétés de milieux de culture (M)

Objectifs : 

  • préparer de façon autonome un milieu de culture, depuis la pesée jusqu'au coulage dans les boites de Pétri
  • ensemencer chaque milieu de culture avec 8 souches bactériennes différentes (Gram + ou -) pour vérifier si la croissance est possible et l'aspect obtenu après culture.
  • comprendre pourquoi une bactérie cultive ou non sur un milieu et à quoi  est du l'aspect qu'elle présente sur chacun des milieux testé
  • préparer une démonstration de "Microbial art" pour la journée portes ouvertes.

 

Un milieu de culture est une préparation, contenant des substances (biologiques ou chimiques) qui reproduit un environnement (nutriments, pH, pression osmotique) permettant à certains types de micro-organismes de se multiplier.
Il existe une grande variété de milieux de culture qui sont utilisés pour produire, conserver, isoler ou identifier certains micro-organismes.

Voici quelques sources utiles pour compléter le propos :

- Milieux de culture (source : Wikipedia)

- Liste de milieux de culture (source : Wikipedia) (remarque : liste non exhaustive !)

Les milieux de culture selon leurs usages (source : site internet du Lycée de la Vallée de Chevreuse

 

8 milieux de culture sont à préparer par groupes de 3 élèves (1 groupe è 1 milieu), leur compostions et mode de préparations sont présentés dans les documents 1 à 

Exlpiquer pourquoi les milieux de culture sont stockés sous forme déshydratés. 

Calculer, en mm3, le volume de milieu coulé dans une petite boîte de Pétri de diamètre 50 mm, sur 3 mm de hauteur. Arrondir la valeur sans virgule. Calculer le volume pour 6 boites.
Convertir 
le volume précédent en mL (arrondir sans virgule).

Calculer le volume de milieu nécessaire pour préparer 4 grandes boites de pétri (90 mm de diamètre) sachant que la boite doit contenir une hauteur de 3 mm de milie

Matériel biologique : souches bactériennes de classe 1 (bouillons nutritifs ordinaires ensemencés la veille et incubés 24 h à 37 °C)

Escherichia coli (Gram -)

Pseudomonas fluorescens (Gram -)

Serratia marcescens (Gram -)

Bacillus cereus (Gram +)

Micrococcus luteus (Gram +)

Staphylococcus xylosus (Gram +)

Staphylococcus epidermidis (Gram +)

 

Préparation du milieu de culture : choisir un milieu de culture par trinôme

  • Étiqueter 8 petites boites de Pétri du nom du milieu à préparer.
  • Peser la masse nécessaire pour préparer 50 mL de milieu de culture en suivant les consignes des documents 1 à 8 (Attention : masses différentes pur chaque milieu)
  • Peser directement dans un bécher la masse voulue.
  • Prélever 50 mL d'eau préalablement portée à ébullition avec l'éprouvette graduée.
  • Rajouter progressivement les 50 mL d’eau distillée préalablement portée à ébullition tout en agitant jusqu’à dissolution complète.
  • Répartir le contenu dans 8 petites boites de Pétri en condition aseptique.
  • Une fois solidifiée, distribuer une gélose à chaque autre binôme.

 

Ensemencement des milieux : 4 milieux par trinôme + 1 micro-organisme

Chaque binôme ensemence un micro-organisme parmi les 8 proposés.
Réaliser un isolement de la souche choisie sur chacun des 4 milieux.

Attention : une bonne organisation est indispensable (étiquetage des boites : nom binôme, nom milieu, nom micro-organisme ensemencé).

Milieux préparés (jour 1) :Preparation milieux de culture 2

 

Observation des milieux après 24 h de culture (jour 2) :Milieux de culture 3

Milieu DRIGALSKI :Drigalski lac lac

  • à droite, une souche lactose (-) qui présente la particularité de produire un pigment rouge (bactérie : Serratia marcescens), et qui est le plus souvent lactose (+) !
  • à gauche, une souche lactose (+) (bactérie : Escherichia coli), avec une zone redevenue verte, probablement par réalcalinisation du milieu suite à l'épuisement du lactose à cet endroit (utilisation de peptones)

Conclusion : se méfier des clichés "la microbiologie, c'est plus facile que la biochimie". N'oublions pas que nous travaillons avec des organismes vivants, pas avec des solutions.

 

Milieu HEKTOENHektoen e coli

Preparation milieux de culture 7

 

Milieu CHAPMANChapman mannitol

  • à droite, une souche mannitol (-) qui cultive mais n'acidifie pas le milieu (bactérie : Staphylococcus epidermidis) 
  • au centre, une souche mannitol (+) qui cultive ET acidifie le milieu (bactérie : Staphylococcus xylosus) 
  • à gauche , une souche mannitol (-)  (bactérie : Pseudomonas fluorescens) ; notons que la couleur du milieu est nettement plus vive que celle du milieu de droite

Preparation milieux de culture 10

 

Milieu EMB
Img 20181218 094407

Bactérie Escherichia coli avec son aspect caractéristique sur ce milie (aspect en "dos de scarabée")

Milieu Baird-ParkerBaird parker staph aureus 3

Bactérie Staphylococcus xylosus présentant :

- des colonies  noires, due à la réduction du tellurite (présent dans le milieu) en tellure ;

- un halo clair autour de la colonie du à l'hydrolyse (protéolyse) des protéines du jaune d'œuf présent dans le milieu ; 

- un liseré blanc opaque du à l'hydrolyse, par une lécithinase, des lécithines du jaune d'œuf qui se traduit par (précipité blanc des acides gras).

 

Exemples de fiche milieu de culture réalisée par un groupe de 3 élèves au cours de cette activité :

48376105 1279191978887728 3822927081382084608 n

47680280 1277155495758043 2876698382519238656 n

Date de dernière mise à jour : 17/02/2024

Commentaires

  • devin

    1 devin Le 30/03/2024

    bonjour

    je cherche un schéma expliquant comment homogénéiser l'inoculum au milieu de culture ds une boite de pétri en faisant des 8

    auriez vous ce type de schéma svp merci
    Sébastien Droguet

    Sébastien Droguet Le 27/04/2024

    un schéma pour expliquer comment faire tourner les boites en faisant un 8 ???
  • Reinhard Dorine

    2 Reinhard Dorine Le 31/01/2023

    Bonjour,

    Actuellement étudiante à l'université de La Rochelle, je souhaiterais savoir si il serait possible d'utiliser vos images dans le cadre d'une présentation de microbiologie qui sera présentée en classe ?
    Vos images nous permettront d'enrichir notre projet en plus de nos photos.

    Cordialement, Dorine Reinhard.
    Sébastien Droguet

    Sébastien Droguet Le 05/02/2023

    Bonjour Mes images sont libres de droit (peut-être pas pertinent mais vraiment autre chose à faire que de m'occuper de ça). Donc oui pas de problèmes pour les utiliser, pour peu que la source soit mentionnée une fois.
  • anthony doizy

    3 anthony doizy Le 11/07/2019

    Bonjour,

    Je suis actuellement enseignant en lycée professionnel en Biotechnologie Santé Environnement. Je souhaite préparer les CAPET BGB l'an prochain.

    Je suis impressionné par l'originalité de vos séances de travaux pratiques. Quel travail ! Le rendu est très intéressant.

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