Objectif  : mettre en œuvre une série de procédures opératoires qui permettront de valider l’affirmation "nous sommes entourés en permanence par des micro-organismes" et de mettre en évidence des modes de transmission de micro-organismes.

Depuis la première observation des micro-organismes à la fin du XVII^ème siècle et la mise en évidence de leur implication dans de nombreux phénomènes et maladies (notamment par Louis Pasteur), il a été montré que nous sommes entourés en permanence par des micro-organismes que nous ne voyons généralement pas. Il y en a dans l’air, dans les eaux, sur les objets, dans le sol, sur notre peau, dans les aliments… et même dans des environnements extrêmement hostiles à toute autre forme de vie.

Si la plupart sont inoffensifs, certains peuvent être pathogènes. La protection du manipulateur, de la manipulation et de la communauté sont donc essentielles dès lors que du matériel biologique potentiellement pathogène est employé.

Vidéos d'intérêt pédagogique :

https://www.futura-sciences.com/sante/videos/sont-differences-bacteries-virus-5603/

Mise en évidence de l'omniprésence des micro-organismes

Matériel et réactifs

- Géloses Tryptycase-Soja (GTS ou TSA en anglais) stériles en grandes boites de Pétri 
- Géloses "contact" à surface bombée en petite boite de Pétri
- Etuve microbiologique réglée sur 37 °C (température à vérifier avec un thermomètre à alcool)

Procédures opératoires

-Noter sur la tranche du fond de la boîte de Pétri le numéro de poste et le numéro de manipulation :

-Déposer les boites, couvercles en bas dans l’étuve è évite la formation de condensation sur le couvercle et permet de les prendre par le couvercle sans risque de les ouvrir.
-Incuber 18 h à 37 °C.

Résultats des manipulations :

Géloses "contact" contenant un milieu nutritif ordinaire apposées sur différents vêtements de ville, chaussures, trousse, blouse de laboratoire... Ou comment le microscopique devient visible à l'oeil nu et permet de comprendre la notion de "Bonnes Pratiques de Laboratoire" pour protéger la Communauté, le Manipulateur ainsi que la Manipulation de toute biocontamination.

Pour chaque milieu de culture, procéder de la façon suivante :

observation : décrire le nombre de colonies totales présentes, le nombre d'aspects différents de colonies, et s'entrainer à décrire chaque colonie selon les critères usuels (taille, contour, aspect en coupe, surface, consistance, tranparence à la lumière, couleur, type)

Interprétation : mettre en relation les observations précédentes avec le contexte de l'expérience

conclusion : déduire des étapes précédentes des actions correctrices pour limiter l’impact de la flore microbienne sur les futures manipulations en microbiologi

Pour les boites 8 et 9, il est possible d'effectuer un dénombrement et de la ramener à une surface parfaitement définie. Quelle particularité de ces boites permet d'effectuer ce calcul (dont le résultat peut ensuite êter comparé à une norme) ?

Reproduire sur une page entière le tableau ci-dessous.

Décrire ce qui est observé sur chaque milieu (pour chaque expérience).

Dénombrer (si possible) les colonies présentes sur chaque boite

Indiquer le nombre de colonies différentes présentes sur chaque boite.

Expliquer l’intérêt de l’étape d’incubation.

Expliquer le rôle de la boite 0. Indiquer quel nom lui donner.

Interpréter chacune des expériences en finissant de remplir le tableau.

Commenter l’intérêt de cet appareil : aérobiocollecteur de germes

Simulation d'une transmission de micro-organismes fécaux
(d'après un article de Pascal Picquot & Catherine Durandet, IUT de Yutz Thionville, paru dans l'Opéron n° 82)

-Chaque binôme prépare 1 ou 2 ou 3 ou 4 feuilles de papier hygiénique (en préparer deux jeux).
-Un élève du binôme revêt un gant à usage unique et enveloppe 3 doigts de papier hygiénique avec sa(ses) feuille(s) de papier hygiénique puis applique pendant 5 secondes exactement les trois doigts sur la culture de la bactérie Serratia plymuthica (classe 1)
-Immédiatement après, les doigts sont lavés dans 10 mL d'eau physiologique stérile (à verser du flacon vers la boite de Pétri stérile).

-Le gant est enlevé en suivant les instructions de la fiche INRS puis jeté dans le sac à autoclave.
-Un volume de 0,1 mL de la solution de lavage est prélevé à la pipette graduée stérile puis déposé à la surface d'une gélose GTS.
-Immédiatement, un étalement en surface avec des billes de verre stérile (méthode dite "Copacabana") est réalisée (cf. démonstration).
-Les billes de verre sont récupérées à la pince et déposées dans un bécher contenant de l'eau de Javel fraiche, tout comme la pince en fin de récupération des billes.

-Incuber chaque boite 48 h à 25 °C et à l'abri de la lumière, conditions optimales pour la production d'un pigment rouge (la prodigiosine) caractéristique de cette bactérie.
-Le second élève du binôme réitère la procédure mais sans porter de gants.
-Dans chaque cas, un lavage soigneux des mains au savon désinfectant sera réalisé après la manipulation.

Schéma de la procédure opératoire :

Résultats obtenus avec le port d'un gant à usage unique et successivement 1 feuille, 2 feuilles puis 3 feuilles de de papier hygiénique "qualité lycée" :D 

Disposer les boites selon le tableau suivant, prendre une photo. La partager informatiquement.

En déduire le nombre de couches de papier hygiénique empêchant une contamination cutanée avec ou sans gants.

Comparer l'aspect du au port des gants. Indiquer s'ils présentent une utilité.

Proposer une procédure simple permettant de montrer si les gants préviennent une contamination cutanée du manipulateur.

Mise en évidence d'une transmission en chaine de micro-organismes

-Immersion d'une main d'élève (patient "0", source de la contamination) dans un mélange farine/levure de boulanger.
-Le patient "0" serre la main d'un patient "1"  et ainsi de suite.
-Chaque patient pose la paume de sa main à la surface d'un milieu nutritif gélosé sélectif des levures (Sabouraud additioné de chloramphénicol).

Les levures transmises de main à main sont visibles, après 36 h de culture à 37 °C, sous forme de colonies blanches :

"Patient 0" (résultats année 2016-2017)

"Patient 1"

"Patient 2"

"Patient 3"

"Patient 4"

Vue d'ensemble :
- ligne supérieure : patient 0 ==> patient 1 ==> patient 2 ==> patient 3 ==> patient 4
- ligne inférieure : patient 5 ==> patient 6 ==> patient 7 ==> pâtient 8

Que peut-on observer sur chacun des milieux de culture après incubation ?

Les résultats permettent-il de mettre en évidence un mode de transmission ? Si oui, lequel ?

Comment se prémunir d'une telle transmission ?

En conclusion, une vidéo présentant les travaux d'Ignace Philippe Semmelweis médecin obstétricien qui démontra l'utilité du lavage des mains après la dissection d'un cadavre et avant d'effectuer un accouchement. Il démontra également que le lavage des mains diminuait le nombre des décès causés par la fièvre puerpérale des femmes après un accouchement.