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Immunoprécipitation Simple - méthode de Mancini

Préambule : les informations, valeurs, tableaux, graphes et questions présentées ci-dessous ne sont qu'une partie du sujet étudié. Certaines questions ne figurent pas dans le document support de l'activité mais ont été posées au cours des séances.

 

L’immuno-précipitation (ou précipitation) est un phénomène au cours duquel des antigènes solubles se combinent avec des anticorps spécifiques pour former un réseau visible sous forme de précipités visibles à l’œil nu.

L’antigène soluble dans l’eau est généralement une protéine ou un polyoside

Immunoprecipitation schema moleculaire

La réaction de précipitation est maximale pour un rapport Ag/Ac précis : le système est alors à l’équivalence, le réseau formé est complet.

La réaction de précipitation peut être inhibée par un excès d’Ac ou d’Ag, le réseau est alors incomplet: c’est le phénomène de zone (source : technique d'immunologie, CRDP édition Aquitaine)

Immunoprecipitation courbe de zone 2

 

Les réactions de précipitation sont très sensibles à ce phénomène, d’où la nécessité de travailler avec des dilutions différentes de l’Ag ou de l’Ac à étudier

 

Dosage d'une biomolécule par immunodiffusion simple (méthode de Mancini)

Le contexte est ici simulé : il s'agit d’effectuer le dosage de la Serum-Albumine Bovine (SAB ou ASB) par l'utilisation d'anticorps inclus dans une gélose.

La réalisation est ici également simulée  :  un artifice de préparation permet d'obtenir (en moins de trente minutes) des arcs de précipitations ressemblant (plus ou moins...) à des arcs de précipitations dus à des immuns-complexes.

C’est une précipitation par diffusion simple car un seul de réactifs (Ag ou Ac) diffuse dans le milieu gélosé jusqu’à établir un gradient de concentration.

Le plus souvent :
- les anticorps sont contenus dans le gel ; leur concentration est donc constante ;
- une gamme étalon de dilutions d’une solution antigénique de concentration connue est déposée dans une série de puits creusés dans le gel ; l’antigène va donc diffuser en formant un gradient de concentration concentrique (radial) décroissant en s’éloignant du puits.
Mancini principe 2

Un anneau de précipitation, résultant de la formation d’un réseau Ag-Ac, se forme en 24 à 48 heures à température ambiante en chambre humide autour du puits à l’endroit où la concentration en Ag est optimale par rapport à la concentration en Ac (concentrations à la zone d’équivalence).
 

Préparation de la gamme d’étalonnage 

 

Etalon 1

Etalon 2

Etalon 3

Etalon 4

Vsol mère d’ASB

à 5 mg.mL-1 (μL)

12,5

25

50

100

VTampon PBS  (μL)

87,6

75

50

0

ρ (ASB ; sol) en mg.mL-1

0,625

1,25

2,5

5

 

1. Vérifier la concentration en sérum-albumine bovine (ASB) dans chacune des solutions étalon.

 

Test mancini 2018 zn 1m naoh 5 m annote

 

2. Reproduire et compléter le tableau suivant :

 

Étalon 1

Étalon 2

Étalon 3

Étalon 4

E1

E2

ρ (ASB ; solution) en mg.mL-1

 

 

 

 

 

 

Diamètre mesuré D en mm

 

 

 

 

 

 

D2 en mm2

 

 

 

 

 

 

 

3. Tracer sur tableur-grapheur la droite d’étalonnage D² = f (ρ(ASB ; sol. étalon) en mg/mL) puis :

  • Afficher le coefficient directeur et l'ordonnée à l’origine
  • Tracer la droite (si besoin en passant par le point moyen G et l’ordonnée à l’origine)

Remarque : la droite ne doit pas passer par le zéro.

4. Déterminer, à l'aide des paramètres de la droite, la concentration en ASB de la solution à doser pour chacun des deux essais.
 

5. Vérifier la compatibilité des valeurs mesurées (srρ = 0,14 mg.mL-1).

6. Exprimer le résultat de mesure (uc = 0,12 mg.mL-1)

 

Autre exemple de résultats :

Mancini truque

 

Commentaires (17)

Angèle
  • 1. Angèle | 14/01/2021
Bonjour,

J'aimerai également réaliser cette manip avec mes élèves, puis-je connaître les dosages des produits de substitution, ainsi que la composition du gel, s'il vous plaît?

Merci d'avance
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 14/01/2021
Me contacter avec la rubrique "contact"
SCHMITT
  • 2. SCHMITT | 12/12/2020
Bonjour,
Nouvelle enseignante en biotechnologie, je visite très régulièrement votre site internet. C'est une véritable source d'inspiration ! Merci :)
J'aimerai tester la méthode de Mancini avec les produits de substitution, pourriez m'indiquer les concentrations pour la soude et le sulfate de zinc s'il vous plaît?
Merci !
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 13/12/2020
Bonjour, merci pour le retour, même si depuis un an je n'i plus fais de réelle mise à jour) ; contactez-moi en mp par mail.
CecileQ
  • 3. CecileQ | 17/11/2020
Bonjour

Merci pour tous ces exemples de manipulations qui donnent de nouvelles idées à proposer aux élèves.
Faute d'anticorps, je souhaitais mettre au point un Mancini de substitution. Tous les tests réalisés ne me donnent pas de résultats satisfaisants. Les anneaux de précipitation sont trop petits et cela ne ressemble pas du tout à la photo proposée sur cette page. Serait-il possible de consulter votre matière d'oeuvre?
Merci beaucoup.
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 30/11/2020
Vu en MP.
Darinot Isabelle
  • 4. Darinot Isabelle | 05/11/2020
Bonjour
J'apprécie beaucoup ce que vous faites. Je souhaiterais connaitre les dosages de NaOH et de ZnSO4 que vous utilisez pour avoir d'aussi beaux résultats. Merci d'avance. Très cordialement Isabelle Darinot
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 30/11/2020
Vu en MP
sonia khaddar
  • 5. sonia khaddar | 03/11/2020
Bonjour,
Je trouve la fiche technique super bien faite. Depuis plusieurs années je mets en place la technique d'Ouchterlony et ELISA avec des produits de substitution. J'aurais bien aimé mettre en place Mancini avec mes élèves, cependant nous avons du mal à trouver le bon dosage en NaOH et en ZnSO4 pour avoir des résultats interprétables comme les vôtres. Pouvez-vous me donner un coup de main?
Merci beaucoup!
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 03/11/2020
Répondu ^^
Giard
Bonjours,
Merci d'avoir mis en ligne ce cour et cet exercice qui m'ont permis de mieux comprendre la technique de Mancini, mais après avoir fini cet exercice, je me suis aperçu qu'il n'y avait pas de correction. Pouvez-vous, s'il vous plaît, me transmettre la correction de cet exercice afin que je puisse m'auto-évaluer.
Merci
Cordialement
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 11/02/2020
Bonjour, Héééééé....non, je ne fournis pas de correction, c'est ainsi depuis l'ouverture du site, dont l'objectif n'est initialement pas celui de fournir des réponses mais de rappeler / montrer des activités de labo et se poser les questions qui vont avec, questions auxquelles vos enseignants se feront un plaisir de répondre ^^
POUDRAY
  • 7. POUDRAY | 09/12/2019
Bonsoir, merci pour votre site et vos explications. C'est la 1ère année que je suis enseignante et je cherche un moyen de réaliser ce test avec des produits de substitution, est ce que vous pourriez comment vous les réalisé?
Cordialement
FOURNET Claire
  • 8. FOURNET Claire | 17/06/2019
Lycée français Mermoz Dakar
Bonjour à toi. Et merci pour ta fiche technique très bien faite.
Nous ne pouvons pas commander à l'international de test Elisa alors nous sommes à la recherche d'un test d'immunodiffusion simple avec des produits de substitution: NaOH, ZnSO4 par exemple. Peut-on utiliser les mêmes concentrations que pour le test d'Outcherlony ?
Un grand merci.
Claire Fournet.
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 18/06/2019
j'envoie par mail un document de matière d'oeuvre
Claire
  • 9. Claire | 02/05/2019
Bonjour,

Comment réalisez-vous la gélose avec l'AC de substitution? Après divers essais impossible d'arriver à des résultats concluants.
Merci,
Cordialement,
Sébastien Droguet
  • Sébastien Droguet | 02/05/2019
réponse en message privé

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Date de dernière mise à jour : 02/01/2019

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