Chromatographie analytique

Préambule : les informations, valeurs, tableaux, graphes et questions présentées ci-dessous ne sont qu'une partie du sujet étudié. Certaines questions ne figurent pas dans le document support de l'activité mais ont été posées au cours des séances.

 

La chromatographie sur couche mince ayant été étudiée et réalisée en classe de 1ère, il s'agit ici de révision.

 

Rappels sur le principe

  • une chromatographie est une techique de séparation des constituants d'un mélange homogène par entraînement au moyen d'un solvant (éluant ou phase mobile) sur un support (phase fixe ou stationnaire).
  • Chaque constituant est partagé entre :
    • son affinité à rester fixer sur le support (force de rétention)
    • sa solubilité dans le solvant (force d’entrainement) :
  • Plus une substance est soluble dans la phase mobile, plus elle est entraînée par cette phase
  • Inversement, une substance peu soluble dans la phase mobile migre peu.
  • Deux phénomènes peuvent entrer au jeu au niveau de la phase fixe pour une chromatographie d'adsorption solide/liquide :
    • l'adsorption des constituants (si phase fixe = solide)
    • la solubilité des constituants (si phase fixe = liquide)

Phase silice

 

Securite ccm permanganate

 

Préparation de la chromatoplaque en respectant les consignes d'usage :

  • réactivation préalable par chauffage (95 °C, 20 à 30 minutes)
  • distance des dépôts vis à vis des bords ;
  • espacements identitique entre les dépôts ;
  • échantillon à analyser : en double essai, pas sur les bords de la chromatoplaque
  • dépôts clairement identifiés.

 

Cela nécessite évidemment de mesurer au préalable les dimensions de la chromatoplaque afin de calculer l'espacement entre chaque dépôt.

 

Schéma d'une chromatoplaque après migration (=développement) et révélation (ici : CCM d'acides aminés) :

Ccm acides amines

Après développement et révélation, l'exploitation doit se faire de manière très rigoureuse.
Voici un rappel des consignes à suivre (exemple sur un autre type de chromatographies) :

  • marquer immédiatement le front de migration du solvant au crayon graphite
  • entourer chaque spot et délimiter le centre
  • indiquer : référence de la chromatoplaquer, composition de l'éluant, durée de la migration, composition du révélateur.. soit toutes informations utiles 

Ccm glucides 1 exploitation

 

 

Ccm glucides 2 exploitation

 

Ccm glucides 3 exploitation

 

Chromatographie analytique sur couche mince de l'extrait issu de la solubilisation de fraises Tagada

Révélation : comparaison du révélateur aniline et du révélateur permanganate.
La qualité du révélateur est indispensable : les mêmes échantillons "A" ne seront pas analysés qualitativement de la même façon selon le révélateur utilisé.

Comparaison aniline vs permanganate

 

Le cliché ci-dessous a été pris avant que le permanganate imprégnant la phase stationnaire ne change colmplètement de couleur, suivi d'une petite retouche pour faire d'avantage ressortir la coloration jaune (due à la réduction du permangante par les fonctions hydroxyls des glucides:

Ccm permanganate

 

 

Chromatographie analytique sur couche mince d'un mélange d'acides aminés à identifier

Voici trois exemples des chromatoplaques obtenues après révélation lors de cette évaluation des compétences expérimentales :

CCM acides aminés ECE Comparaison

 

Quelles remarques et critiques peut-on formuler :

1. Sur la préparation de chacune des chromatoplaques (identification, position et espacement des dépôts) ?

2. Sur la qualité des dépôts effectués ?

3. Sur la qualité du développement (migration) en lien avec la durée de migration et le solvant utilisé ? L'éluant utilisé offre-t-il une séparation satisfaisante des solutés ?

4. sur l'exploitation des chromatoplaques ?

5. Sur les résultats obtenus (le travail ayant porté sur les mêmes échantillons, avec le même solvant de migration, le même révélateur mais manipulateurs différents et durées de migration différentes) ?

 

 

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Date de dernière mise à jour : 11/02/2017

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